Description

Le multiplex cytokines assay est un système d’immunoassay par billes fluorescentes pour la détection quantitative par cytométrie en flux de l’IL-1β, l’IFN-α, l’IFN-γ, le TNF-α, le MCP1 (CCL2), l’IL-6, l’IL-8 (CXCL8), l’IL-10, l’IL-12p70, l’IL17A, l’IL18, l’IL23, et l’IL33 dans les surnageants de culture, le sérum, le plasma, le sang périphérique ou tout autres fluides corporels.
Le terme de cytokines TH1 et de cytokines TH2 fait référence au motif de cytokines sécrétées par 2 types de sous-populations de cellules T CD4 qui déterminent le devenir d’une réponse antigénique humorale versus une immunité cellulaire. Nombres de cellules autres que les cellules T exprimant le CD4 sont capables de produire des cytokines TH1 et TH2. Ces cellules peuvent être des cellules T CD8, des monocytes/macrophages, des cellules natural killer, des cellules B, des éosinophiles, des cellules mastocytaires, des basophiles, des kératinocytes et d’autres types cellulaires.

Principes du test

Principe de l’immunoassay par billes fluorescentes

Des microsphères sont coatées avec des anticorps dirigés spécialement envers chaque cytokines détectées par le système multiplex. Les billes peuvent être différenciées par leur taille et par leur émission spectrale (Fig 1).
Un mélange de chaque billes coatées pour chaque cytokines est incubé avec l’échantillon ou la gamme du standard. Les cytokines présentes dans l’échantillon se lient à l’anticorps fixés à la bille fluorescente (Fig 2).
Un second anticorps couplé à la biotine est ajouté au mélange, cet anticorps spécifique se lie aux cytokines capturées par le premier anticorps (Fig 3).
La streptavidine-phycoérythrine est ajoutée, elle se lie au conjugué biotine et émet un signal fluorescent (Fig 4).

Principe du FlowCytomix

Deux jeux de microsphères de tailles différentes sont utilisés par le FlowCytomix : taille A de 5.5 µm et taille B de 4.4 µm.

Le jeu de taille A consiste en une population de 6 billes et le jeu de taille B, une population de 7 autres billes marquées avec des intensités de fluorescentes différentes. Les deux jeux de billes permettent ainsi de détecter jusqu’à 13 populations de billes avec un seul canal de fluorescence.